越來越多的科研人員用預(yù)制膠代替手動(dòng)灌膠
首先來跟大家普及一下什么叫預(yù)制膠。
預(yù)制膠,顧名思義,就是廠家預(yù)先制備好的凝膠。預(yù)制膠的好處在于,打開包裝就能用,點(diǎn)上樣本就能跑,可以大大加快了實(shí)驗(yàn)進(jìn)程,同時(shí)也讓您遠(yuǎn)離繁瑣的操作和有毒的試劑,不再為漏膠等問題而煩惱。
預(yù)制膠給很多科研人員帶來更佳的體驗(yàn)感受,原因在于:預(yù)制膠的成分更均一,批間差異小,最終的數(shù)據(jù)將體現(xiàn)出更高的一致性和重復(fù)性;同時(shí),與手動(dòng)灌膠相比,預(yù)制膠分離的蛋白條帶更加銳利,分辨率也更高,能夠獲得更漂亮的電泳結(jié)果。預(yù)制膠還有一個(gè)優(yōu)勢(shì)在于,保質(zhì)期長(zhǎng)。自制的凝膠大約只能保存一周,而預(yù)制膠能保存數(shù)個(gè)月,甚至一年。
如今,越來越多的研究人員開始使用非變性凝膠。與變性凝膠相比,不含SDS的非變性凝膠體系在分離蛋白的同時(shí),能夠保留其天然的結(jié)構(gòu),從而可用于蛋白質(zhì)之間相互作用的研究,以及蛋白質(zhì)復(fù)合物的分離和分析。
NativePAGE Bis-Tris非變性蛋白預(yù)制膠它是基于Blue-Native PAGE的原理,讓考馬斯亮藍(lán)G-250附著在蛋白上使其帶有負(fù)電荷,同時(shí)保持蛋白質(zhì)的天然狀態(tài),不會(huì)使其變性。在上樣前將G-250添加于含有非離子型表面活性劑的蛋白樣本中,可以讓蛋白帶上負(fù)電荷;同時(shí)G-250也會(huì)加于陰極緩沖液中為凝膠提供持續(xù)的G-250供給,傳統(tǒng)的非變性電泳大多采用Tris-甘氨酸系統(tǒng),其工作pH較高(9.3-9.5),會(huì)對(duì)在高pH條件下敏感的蛋白質(zhì)帶來不利影響,相比之下,NativePAGE Bis-Tris預(yù)制膠的工作pH接近中性(7.5-7.7),有助于保持蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)和對(duì)高pH值敏感的蛋白質(zhì)的活性。同時(shí),由于傳統(tǒng)的Tris-甘氨酸非變性電泳系統(tǒng)主要利用工作pH高于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)而使其帶上負(fù)電荷后進(jìn)行電泳,因此不適用于等電點(diǎn)高于電泳工作pH的蛋白質(zhì)。而NativePAGE利用考馬斯亮藍(lán)G-250使蛋白質(zhì)在非變性條件下帶負(fù)電,并在近中性工作pH下進(jìn)行電泳,因此無需再考慮蛋白的等電點(diǎn)造成的限制。
素材來源于網(wǎng)絡(luò)
預(yù)制膠,顧名思義,就是廠家預(yù)先制備好的凝膠。預(yù)制膠的好處在于,打開包裝就能用,點(diǎn)上樣本就能跑,可以大大加快了實(shí)驗(yàn)進(jìn)程,同時(shí)也讓您遠(yuǎn)離繁瑣的操作和有毒的試劑,不再為漏膠等問題而煩惱。
預(yù)制膠給很多科研人員帶來更佳的體驗(yàn)感受,原因在于:預(yù)制膠的成分更均一,批間差異小,最終的數(shù)據(jù)將體現(xiàn)出更高的一致性和重復(fù)性;同時(shí),與手動(dòng)灌膠相比,預(yù)制膠分離的蛋白條帶更加銳利,分辨率也更高,能夠獲得更漂亮的電泳結(jié)果。預(yù)制膠還有一個(gè)優(yōu)勢(shì)在于,保質(zhì)期長(zhǎng)。自制的凝膠大約只能保存一周,而預(yù)制膠能保存數(shù)個(gè)月,甚至一年。
如今,越來越多的研究人員開始使用非變性凝膠。與變性凝膠相比,不含SDS的非變性凝膠體系在分離蛋白的同時(shí),能夠保留其天然的結(jié)構(gòu),從而可用于蛋白質(zhì)之間相互作用的研究,以及蛋白質(zhì)復(fù)合物的分離和分析。
NativePAGE Bis-Tris非變性蛋白預(yù)制膠它是基于Blue-Native PAGE的原理,讓考馬斯亮藍(lán)G-250附著在蛋白上使其帶有負(fù)電荷,同時(shí)保持蛋白質(zhì)的天然狀態(tài),不會(huì)使其變性。在上樣前將G-250添加于含有非離子型表面活性劑的蛋白樣本中,可以讓蛋白帶上負(fù)電荷;同時(shí)G-250也會(huì)加于陰極緩沖液中為凝膠提供持續(xù)的G-250供給,傳統(tǒng)的非變性電泳大多采用Tris-甘氨酸系統(tǒng),其工作pH較高(9.3-9.5),會(huì)對(duì)在高pH條件下敏感的蛋白質(zhì)帶來不利影響,相比之下,NativePAGE Bis-Tris預(yù)制膠的工作pH接近中性(7.5-7.7),有助于保持蛋白質(zhì)的天然結(jié)構(gòu)和對(duì)高pH值敏感的蛋白質(zhì)的活性。同時(shí),由于傳統(tǒng)的Tris-甘氨酸非變性電泳系統(tǒng)主要利用工作pH高于蛋白質(zhì)等電點(diǎn)而使其帶上負(fù)電荷后進(jìn)行電泳,因此不適用于等電點(diǎn)高于電泳工作pH的蛋白質(zhì)。而NativePAGE利用考馬斯亮藍(lán)G-250使蛋白質(zhì)在非變性條件下帶負(fù)電,并在近中性工作pH下進(jìn)行電泳,因此無需再考慮蛋白的等電點(diǎn)造成的限制。
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