1．2 熒光物質8-氨基-1。3，6三磺酸芘(8-amlno-1。3。6-trisulphonic acid，ANTS) 硫酸化多糖用ANTS進行標記，方法是：將0．15 mol·L 的ANTS溶于30％ 的中，加入多糖在45't2下反應15 min后，加入氰基硼，在40℃下反應25 h，反應結束后加水稀釋，溶液透析后進行凍干保存。J。Josef Chmel等人也用ANTS標記過右旋糖酐.

1．3 熒光物質N-甲基靛紅酸酐(N—methylisatoic anhydride，M ) MIA標記多糖是一種快捷，溫和，便利的方法，成功用于右旋糖酐和氨基半乳糖的標記，標記方法是：多糖(5—100 g·L )溶解在0．1 mol·L 的鹽溶液中，pH 8，加入50％的二甲基亞砜(DMSO)，10～20 g·L 的MIA溶解在DMSO中，混勻，室溫放置5～10 min后，加入上述溶液中。反應迅速，可以儲存在一80％中72 h，DMSO的作用是防止DM—SO在水中不溶 J。

1．4 熒光物質5-氨基熒光素(fluoresceinamine，FLA) 一些易溶于水的多糖如果聚糖稱取40 mg的量溶于2．0 mL蒸餾水中，再加入30 mg溶于350 蒸餾水的使之激活。還有一些糖如芽霉菌糖，昆布多糖，硫酸軟骨素，海藻酸均需溶解在水溶液中，超聲處理5 min，膜過濾后通過溶于鹽緩沖液的SephdexG一50，將FLA加入到收集樣品中。二次標記可增加標記效率 。

1．5 熒光物質異硫氰酸熒光素(FITC)FITC標記脂多糖的方法：將4 mg脂多糖加入2 mL的0．5％溶液中0℃攪拌20 min，使脂多糖雙鏈解離為單鏈結構。用10 的1mol·L 鹽酸將其PH值調節(jié)為5，然后加入含5 mg的FITC的0．1 mol·L 磷酸鈉溶液1．5 mL(pH9．5)，并在37~C下攪拌孵育3 h后，在4℃下將其混合物與磷酸鈉溶液徹底分離、離心后，去上清即得FITC．脂多糖 ?。FITC與殼聚糖連接的制備方法：在10．0 mL含1％ 殼聚糖的0．1 mol·L 乙酸溶液中，加入10．0 mL甲醇，再緩慢加入一定體積的2．0 g·L 的FITC甲醇溶液。室溫暗處反應3 h后，用0．2 mol·L 沉淀標記產物” 。

從褐藻中提取出來的海洋硫酸多糖911，由于其末端不含氨基，FITC標記多糖的化學合成反應分兩步：第一步：911一Tyr的合成，將400 mg 911溶于15 mL 0．2 mol·L 的磷酸鉀

緩沖液(pH 8．0)，然后依次加人400 mg酪胺和150 mg，于37℃下反應96 h，間或振蕩。反應完畢，離心分離，將其上清液上Sephadex G-25柱，用水洗脫收集，280 llm

檢測，收集第一峰，凍干得911一Tyr。第二步：911一Tyr—F ITC合成，取200 mg 911一Tyr溶于水，用0．5 mol·L～NaHCO3調pH至8．5，然后加入25 mg F ITC，于室溫、避光下反應過夜，再向反應物中加入無水乙醇至乙醇終濃度為80％ ，有大量亮黃綠色沉淀析出，離心棄去上清液。沉淀加水復溶，乙醇再沉淀，條件同上，重復3次，得911一Try—F ITC，并進一步上Sepha—dex G-25柱純化，收集相應水洗脫組分凍干保存 。

1．6 熒光物質2·氨基吡啶(Aminopyridine，2-AP) 2-AP溶于760 ILL的12 mol·L 鹽酸中，52．9 mg氰基硼溶于100 的水中。直鏈淀粉溶于90％ 的DMSO中，用1．8倍的水稀釋。首先將100 I 的直鏈淀粉溶液加至1O0ILL的2一AP溶液，60℃反應1 h，再加入100 IxL的氰，進一步反應24 h，反應過后用水稀釋，加入300 的1一丁醇和3 L2mol·I 氯化鈉，混合物在4℃冰箱中放置1 h后直鏈淀粉沉淀析出 。

1．7 熒光物質氟硼熒(4，4-difluoro-5，7-dimethyl-4一bora-3a，4adiaza—S—indacene一3一propionicacid，BODIPY)BODIPY通過還原末端對聚二糖進行標記。二糖進行低壓凍干，凍干后溶于含BODIPY的甲醇溶液中。將樣品再次低壓凍干后重新溶解在DMSO中，加入5 iLL乙酸，離心后，室溫反應4 h，再加入5 的1 mol·L還原30 rain后進行低壓凍干，標記過后的樣品溶解在8 50％ 的DMSO中” 。