生化實驗中各種MOPS緩沖溶液的配方
在生物化學實驗中,緩沖液配方是實驗的重中之重,真正可靠的配方可以改變實驗的命運。MOPS,適用于葉綠體薄層備樣的電子傳遞和磷酸化研究;可以配制成多種瓊脂培養基,在極限培養基中作為無毒緩沖液應用于棒狀鏈霉菌的培養和頭孢菌素的生產;可作為二維凝膠電泳中等電聚焦電泳(IEF)的電解質系統成分;還可應用于Northern雜交,作為RNA的分離和轉膜時的緩沖液。如此重要的緩沖液,配方是什么?本文總結了幾乎所有MOPS緩沖液的配方供您參考。
(1)MOPS Buffer (10×)
試劑 質量(1 L) 終濃度
超純MOPS 41.86 g (or 46.26 g鈉鹽) 0.2 M
無水醋酸鈉 4.1g(或6.8g 三水合醋酸鈉) 0.05 M
Na2EDTA (0.5M, pH 7.5) 20 mL 0.01 M
注意事項:
用NaOH將pH調至7.0(如果使用MOPS鈉鹽,則使用冰醋酸調節pH);
不需要高壓滅菌;
在室溫下避光儲存,用鋁箔覆蓋。
(2)MOPS buffer (5X)
試劑 質量 (100 mL) 終濃度 (5X)
MgSO4 0.1204 g 10 mM
MOPS 10.463 g 0.5 M
NaCl 14.61 g 2.5 M
將上述試劑溶解在50mL H2O中,用NaOH調節pH至7.5,定容至100mL。過濾消毒,避光儲存。
(3)MOPS salts
試劑 MOPS Tricine FeSO4?7H2O NH4Cl K2SO4 CaCl2?2H2O MgCl2
NaCl
含量 400mM 40mM 0.1mM 95mM 2.8mM 5μM 5.3mM 0.5M
上述試劑配制的溶液最終體積為1L,過濾滅菌。
(4)MOPS-EGTA buffer
試劑 質量(for 1 L) 終濃度
MOPS 20.9 g 0.1 M
MgSO4 0.24 g 2 mM
EGTA 0.38 g 1 mM
NaCl 29.2 g 0.5 M
將上述試劑溶解在800mL DEPC處理的水中,用NaOH調節pH至7.5,然后加入定容至為1L。使用0.22μm過濾器對緩沖液進行過濾滅菌。
(5)MOPS 電泳緩沖液
0.2M MOPS(pH 7.0),20mM乙酸鈉,10mM EDTA(pH 8.0)。
10x溶液:將41.8g MOPS溶解在700mL DEPC處理過的水中,用2N NaOH調節pH至7.0。加入20mL DEPC處理的1M乙酸鈉和20Ml DEPC處理的0.5M EDTA(pH8.0),定容至1升。過濾滅菌,室溫避光保存。
(6)PFA-MOPS-EGTA fixation buffer
試劑 質量(50 mL) 終濃度
多聚甲醛 2 g 4% (w/v)
NaOH (1 N) 5 mL /
HCl (1 N) 5 mL /
MOPS-EGTA 50 mL /
將2g多聚甲醛加入5mL的1N NaOH中,加熱至60°C溶解。加入5mL 1N HCl和35mL MOPS-EGTA緩沖液。4°C下保存。
希望這些配方可以幫助您在實驗中取得成功。
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